挪威械黃金楓葉片花色素苷的提取及穩定性研究

通過(guò)對挪威槭黃金楓葉片花色素苷不同提取液、提取時(shí)間的研究，結果表明：1%鹽酸乙醇和1%鹽酸甲醇所提取的花色素苷含量明顯高于0.1mol/L鹽酸提取的花色素苷含量；最佳的提取時(shí)間是5—6llo通過(guò)對不同光源、溫度、酸堿度對挪威槭黃金楓葉片中花色素苷穩定性的研充結果表明：挪威槭黃金楓花色素苷對光強和溫度比較敏感低溫黑暗條件能較好地保持花色素苷的穩定性；隨著(zhù)pH值的增掘花色素苷顏色由紅變褐花色素苷特征吸收峰逐漸消失。

挪威槭黃金楓（4．platanozdFs）為槭樹(shù)科械樹(shù)屬落葉喬木。葉掌狀5裂，常年紫紅色，葉柄細長(cháng)，具有極高的觀(guān)賞價(jià)值。然而，在上海引種栽培挪威槭黃金楓的過(guò)程中發(fā)現，其葉色在高溫季節出現生產(chǎn)上的“高溫返青”現象，降低了挪威槭黃金楓的觀(guān)賞價(jià)值。顯然，弄清挪威槭黃金楓葉色變化的機理，對制定正確栽培措施意義重大。

花色素苷是影響挪威械葉色變化的主要色素，花色素苷的顏色因細胞液pH值、溫度、光照、糖、金屬離子、氧化還原物質(zhì)、酶等的不同而呈現不同的顏色（趙昶靈等，2004;龐學(xué)群等，2001;張志良，1990），如何保證花色素苷的提取及穩定性尤為關(guān)鍵。筆者研究了不同提取液、提取時(shí)間、溫度、光塬、提取液pH等條件對挪威槭黃金楓葉片中花色素苷的含量及穩定性的影響，為挪威槭黃金楓葉色機理的探索、花色素苷的提取及色素的開(kāi)發(fā)利用提供參考和依據。

1材料與方法

1.1材料的采集供試樹(shù)種為2004年4月從加拿大引種的5年生挪威槭黃金楓，胸徑6cm左右，高6.5—10m。晴天上午9:00～10:00采集枝條中部葉片，采后立即放入冰盒保存。用自來(lái)水沖洗葉片3—4次，然后用蒸餾水沖洗，晾干；去葉柄及葉脈后剪碎混勻，備用。

1.2色素的提取

1.2.1浸提液的選擇。分別稱(chēng)取lg葉片，加10ml不同浸提劑：0.1mol/L鹽酸、1%鹽酸甲醇、1%鹽酸乙醇，置于32℃、160轉的振蕩培養箱中浸提5b過(guò)濾。取1ml濾液用浸提液稀釋25倍，立即用可見(jiàn)分光光度計在400～700rm范圍內掃描。每處理重復3次。

1.2.2浸提時(shí)間的選擇。分別稱(chēng)取1.00g葉片，加lOmll%鹽酸乙醇置于32℃、160轉的振蕩培養箱中分別提取2、3、4、5、6、7、8、24h過(guò)濾，取Iml濾液用1%鹽酸乙醇稀釋25倍，迅速檢測530、657nm處的吸光值。

1.3色素穩定性測定稱(chēng)取10g葉片，加1%鹽酸乙醇100ml，置于32℃、160轉的振蕩培養箱中漫提5h，過(guò)濾，置于4℃的冰箱中冷藏備用。

1.3.1不同光源處理。取20ml提取液用1%鹽酸乙醇稀釋25倍，分別置于：黑暗、日光燈（置于光照培養箱）中、自然光條件下，每隔th取樣1次。

1.3.2不同溫度處理。取20ml提取液用1%鹽酸乙醇稀釋25倍，分別放置于4、25、35、55、75℃的黑暗條件下，每隔th取樣1次，用自來(lái)水冷卻至室溫，測定530、657rm的吸光值。

1.3.3不同pH值的緩沖液處理。取Iml提取液于具塞比色試管，分別用pH值為0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的緩沖液定容至25mL搖勻后于黑暗中平衡3h，在400—700nm范圍掃描。pH值0：HCll.0mol/L;pH值l：HC10.1mol/L;pH值2：HC10.Ollmol/L;pH值3.0—8.0：用磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖液配制。

以上每處理均重復3次，花色素苷的含量均以鮮重AS0-0.25A 7／g來(lái)表示。

2結果與分析

2.1各因素對花色素苷提取效果的影響

2.1.1不同浸提液。由圖1可以看出：1%鹽酸甲醇和l%鹽酸乙醇的吸收光譜大致相同，有3個(gè)吸收峰：420、530、657nm;0.1mol/L盆酸的吸收峰單一為515nm。從圖1還可以看出0.1mol/L鹽酸提取的花色素苷含量顯著(zhù)低于1%鹽酸甲醇和1%鹽酸乙醇提取的花色素苷的含量。因此在提取挪威槭黃金楓組織中花色素苷時(shí)應選用1%鹽酸甲醇或l%鹽酸乙醇作為提取液，以充分抽提其組織中的花色素苷。

2.1.2時(shí)間長(cháng)短。圖2顯示：浸提時(shí)間在Sh前，隨著(zhù)時(shí)間增長(cháng)花色素苷含量急劇增加，在達到Sh時(shí)，花色素苷含量達到最高值，浸提5—6h花色素苷含量比較穩定，以后隨著(zhù)浸提時(shí)間的延長(cháng)花色素苷含量下降。因此，在提取挪威槭黃金楓花色素苷的穩定性及浸提液的研究中浸提時(shí)間選用Sh。

2.2光源、溫度、pH值對花色素苷特性的影響

2.2.1不同光源。如圖3所示，黑暗條件下花色素苷基本不降解，自然光和日光燈均導致挪威槭黃金楓葉片花色素苷降解，花色素苷含量下降。其中自然光作用最強烈，8h時(shí)花色素苷含量?jì)H為原來(lái)的79.06%;日光燈次之，8h時(shí)花色素苷含量為原來(lái)的90.35%；而黑暗時(shí)花色素苷含量則為原來(lái)的99.34%。由表1可以看出，各處理間差異極顯著(zhù)，表現出花色素苷類(lèi)色素光穩定性差的特征。

2.2.2不同溫度。表2、圖4表明：4℃的花色素苷含量顯著(zhù)高于其他處理的花色素苷含量，8h后的降幅僅為0.66%;25妯寸花色素苷降解加快，8h后的降幅為2.93%；當溫度繼續升高降幅則持續升高，35℃時(shí)為4.51%、ssoc時(shí)為9.01%、75oC時(shí)為l7.06%。故挪威槭黃金楓葉片的花色素苷對溫度表現出敏感性。

2.2.3不同pH值。由圖5可以看出，pH值在0—3.0時(shí)花色素苷呈現其特征吸收峰，最大吸收波長(cháng)在515nm。pH值為1.0時(shí)花色素苷含量最高，以后隨著(zhù)pH值升高其含量逐漸減小，當pH值達到4.0時(shí)特征吸收峰幾乎完全消失，而花色素苷顏色在此pH值下開(kāi)始褪色，pH值>4.0時(shí)花色素苷的顏色逐漸變淡直至趨于淡黃色，當pH值達到7.0時(shí)變?yōu)楹稚Ｓ纱丝梢?jiàn)，挪威槭黃金楓葉片花色素苷的顏色呈現具有pH值依賴(lài)性：在低pH值時(shí)較穩定且呈現增色效應，提高pH值導致花色素苷褪色和變色。

3討論

(1)不同植物的花色素苷的最佳提取條件不同，就挪威槭黃金楓而言，應選用1%鹽酸甲醇或1%鹽酸乙醇作為提取液、最佳提取時(shí)間是5—6h’以充分抽提植物組織中的花色素苷。

(2)挪威槭黃金楓的花色素苷表現出光、熱穩定性差的明顯特征，低溫相黑暗條件能較好地保持花色素苷的穩定性，因此，在整個(gè)提取分析過(guò)程中應盡量避光操作，同時(shí)還應注意控制提取溫度。

(3)花色素苷含量的計算方法有多種，常用的為鮮重的①Aso/g(張志良，1990)，②A(yíng)530-0.25A657／g(Rabino&Manc-in-elli1986)，③A525-A5S5/g(NanatAlla,1995)，④Asio/g,在pH值為3時(shí)測定（蔣世云等，1999），⑤As30_A600/9(林植芳等，1988)。挪威槭黃金楓葉片中含有大量的葉綠素，在檢測花色素苷含量時(shí)必須考慮葉綠素及其降解產(chǎn)物的干擾性吸收。對其花色素苷的提取液在400～700nm范圍內掃描，發(fā)現在530、657nm有明顯的吸收峰，因此以鮮重A530-0.25A657／g來(lái)計算挪威槭黃金楓葉片中花色素苷的含量。

(4)對挪威槭黃金楓葉片花色素苷穩定性研究表明：高溫、強光和高pH值條件下均能促使花色素苷降解，因此在挪威械的栽培中，建議可在高溫季節采取遮陰、葉面噴低濃度的酸性水溶液（如檸檬酸水溶液、礬肥水）等措施來(lái)防止葉色出現“高溫返青”。

(5)花色素苷是100多種水溶性植物色素的總稱(chēng)，由于種類(lèi)和含量的不同其特征吸收峰也有所不同，而提取液的種類(lèi)和酸堿度對其特征吸收峰也有明顯的影響。因此，在測定植物組織中花色素苷含量時(shí)，應先用“紫外一可見(jiàn)分光光度計”掃描提取液的波長(cháng)，確定花色索苷的最大吸收波長(cháng)后，才能根據相應公式進(jìn)行計算，若僅根據參考文獻確定特征吸收峰，計算花色素苷含量，可能會(huì )造成嚴重的偏差。

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