挪威黃金楓和自由人槭組織培養獲得無(wú)菌試管苗的研究

槭樹(shù)植物是槭樹(shù)屬(Acer)的泛稱(chēng)，其木材質(zhì)地堅硬，材質(zhì)細密，是良好的家具、農具、枕木及建筑用材，樹(shù)冠冠幅較大，樹(shù)姿優(yōu)美，葉形秀麗，秋季樹(shù)葉漸變?yōu)榧t色或黃色，為著(zhù)名的秋色葉樹(shù)種，是理想的行道樹(shù)或城市綠化庭園樹(shù)種，在各地風(fēng)景園林中得到普遍應用。挪威黃金楓(AcerplatanoidesLinnd)和自由人槭(Acerreema-niiAutumnBlaze)是由北美引進(jìn)的槭樹(shù)中的經(jīng)典品種，該試驗介紹這2種槭樹(shù)組織培養初代培養的研究，有效的獲得了2種槭樹(shù)的無(wú)菌試管苗，為這2種槭樹(shù)的組織培養快繁技術(shù)研究提供了參考。

1材料與方法

選取飽滿(mǎn)的挪威黃金楓種子和自由人槭頂芽、幼嫩莖段，用清水沖洗2～3h，在超凈工作臺上，去除挪威黃金楓種子外種皮，剪取自由人槭頂芽和幼嫩莖段75%酒精浸潤30s，無(wú)菌水沖洗2～3次，0.1%升汞消毒4～12mb清水沖洗3～4次接種于添加2種不同植物生長(cháng)調節劑的2種不同培養基中(培養基添加蔗糖30g/L、瓊脂6g/L,pH調至5.8，選用正交試驗表L4(23)和L8(27)，試驗因素和水平見(jiàn)表1），放置在溫度22～28℃，光照條件分別為3000～5000lx光照和黑暗的環(huán)境中培養，重復3次1周后統計無(wú)菌率，2周后，去除污染中毒的統計萌發(fā)率，4周后統計萌發(fā)芽的成苗率。

2結果與分析

2.1升汞不同消毒時(shí)間對無(wú)菌率和中毒率的影響

從表2中得出，挪威黃金楓以種子為外植體，升汞消毒時(shí)間在8min以上日寸，無(wú)菌率達100%,但中毒率隨著(zhù)消毒時(shí)間的增加而增高，升汞消毒時(shí)間在8min以下時(shí)，無(wú)中毒現象，但無(wú)菌率隨著(zhù)時(shí)間的減少而降低，升汞消毒時(shí)間在8min時(shí)無(wú)菌率最高，中毒率最低，得出挪威黃金楓以種子為外植體，升汞消毒時(shí)間在8min,消毒效果最佳。

自由人槭以頂芽為外植體隨著(zhù)升汞消毒時(shí)間的增加，無(wú)菌率也隨著(zhù)增加，消毒時(shí)間在6min以下，中毒率為0，說(shuō)明隨著(zhù)升汞消毒時(shí)間的增加雜菌被殺死的比率在升高，但消毒時(shí)間過(guò)長(cháng)，頂芽的細胞和組織發(fā)生了嚴重的中毒現象，升汞消毒時(shí)間在6min時(shí)，無(wú)菌率最高中毒率最低，得出自由人槭以頂芽為外植體，升汞消毒6min消毒效果最佳；自由人槭以幼嫩莖段為外植體日寸，升汞消毒時(shí)間較頂芽時(shí)間要長(cháng)，原因是莖段較頂芽木質(zhì)化程度高，莖段的細胞和組織較耐殺毒且所含的雜菌多，綜合各因素得出，自由人槭以細嫩莖段外植體時(shí)，升汞消毒10min,消毒效果最佳。

2.2不同溫度和光照條件對萌發(fā)率的影響

由表3得出，挪威黃金楓種子在黑暗條件下，平均萌發(fā)率為95.67%，在光照3000～5000lx平均萌發(fā)率為91.67%，當溫度在24～26℃時(shí)，平均萌發(fā)率最高達到96.25%，表明挪威黃金楓種子在黑暗條件下，更有利于種子的萌發(fā)，溫度在24～26℃時(shí)，適于種子的萌發(fā)。同樣，由表3數據得出，自由人槭的頂芽和幼嫩莖段在黑暗條件和有光條件下平均萌發(fā)率很接近但在黑暗條件下，頂芽和幼嫩莖段萌發(fā)出的芽弱。自由人槭以頂芽為外植體萌發(fā)率明顯高于以幼嫩莖段為外植體，原因是頂芽具有頂端優(yōu)勢，萌動(dòng)能力強。溫度在24～26℃時(shí)，自由人槭以頂芽和幼嫩莖段平均萌發(fā)率最高。綜合各因素得出，自由人槭以頂芽為外植體更有利于芽的萌發(fā)，溫度在24～26℃光照條件下為最適的培養溫度。

2.3不同培養基和外植體對成苗率的影響

2.3.1不同培養基類(lèi)型和激素濃度對挪威黃金楓種子成苗率的影響4周后，新芽長(cháng)出2片子葉，高在1cm以上時(shí)，統計挪威黃金楓種子和自由人槭不同外植體成苗率。由表4得出，外植體在MS培養基中的平均成苗率最高達96.5%，細胞分裂素BA為0.5mg/L時(shí)，平均成苗率最高達96%，生長(cháng)素NAA為0.2mg/L時(shí)，平均成苗率為95%，略高于生長(cháng)素為0.1mg/L時(shí)的成苗率0綜合3個(gè)因素得出，選用MS培養基添加0.5m/L的6～BA和0.2mg/L的NAA有利于挪威黃金楓種子的成苗。

2.3.2不同培養基類(lèi)型、激素濃度和外植體對自由人槭成苗率影響由表5得出，自由人槭以頂芽為外植體時(shí)平均成苗率最高達97.5%在MS培養基中平均成苗率最高達96%當NAA濃度為0.2mL時(shí)平均成苗率最高達96%,當6-BA濃度分別為0.5mg/L和0.2mg/L時(shí)，平均成苗率均為95.5%表明6～BA濃度的高低對自由人槭成苗率沒(méi)有顯著(zhù)的影響。綜合各因素得出以頂芽為外植體選用MS培養基添加0.5mg/L或0.2mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA,有利于自由人槭頂芽的成苗。
 

3結論

挪威黃金楓以種子為外植體，0.1%升汞消毒8min,消毒效果最佳，無(wú)菌率達100%中毒率為0；自由人槭以頂芽為外植體，0.1%升汞消毒6min,無(wú)菌率達95%中毒率為0。挪威黃金楓種子在黑暗條件下，溫度在24～26℃時(shí)萌發(fā)率最高達98%；自由人槭以頂芽為外植體，溫度在24～26℃光照3000～5000lx條件下為最適的培養條件，平均萌發(fā)率最高達97.5%。選用MS培養基，添加0.5mg/L的GBA和0.2mg/L的NAA有利于挪威黃金楓種子的成苗，平均成苗率在95%以上；自由人槭以頂芽為外植體，選用MS培養基，并添加0.5mg/L或0.2mg/L6-BA,0.2mg/LNAA濃度，成苗率在95%以上。

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